Так получил исцеление расслабленный Феодор, «раб» Иоанна Тимофеева Юрлова: при посещении Макариева монастыря игумен поднёс Юрлову икону преподобного. Образ Макария хранился у родителей некоего Алексея, получившего облегчение от болезни после молитвы перед ним. Икона, согласно одной из редакций текста вырезанная на древе от гроба преподобного («икона рака чюдотворцова гробу а на ней нарезан образ Макариев»; Российская государственная библиотека), находилась у священника обители Серапиона, исцелившего с её помощью бесноватого Иоанна, сына Марии Дурасовой. Почитание подобных святынь и частиц мощей Макария (например, о частице, хранившейся в обложенной серебром «воротной иконе», сообщается в 1575 в описи Краснохолмского Николаевского Антониева монастыря) было действенным способом распространения почитания святого и сведений о его иконографии. Центром почитания Макария, очевидно, стал Иосифов Волоцкий монастырь, где, согласно описи 1545 г., дополнявшейся в 1547 г., находились две пядничные иконы преподобного. Одна из них была вложена старцем Марком, «Андреевским человеком Карпова». Появление этих образов могло быть связано с тем, что насельники монастыря по традиции, унаследованной от преподобного Иосифа Волоцкого и его ученика Даниила, Московского митрополита, при котором были обретены мощи Макария, почитали преподобного. Эту гипотезу подтверждает составленный в 1520–1530 гг. «Волоколамский патерик», куда вошло краткое «Житие Макария», написанное на основе устного рассказа преподобного Иосифа Волоцкого, который лично знал Калязинского чудотворца. Во второй половине XVI в. имя Макария получило большую известность, что объясняется причислением его к общерусским святым на Соборе 1547 г., а также визитом в 1544 г. в Калязинский монастырь великого князя Ивана IV Васильевича («Полное собрание русских летописей», том 13). Несмотря на крайнюю редкость относящихся к этому времени образов святого, об их существовании свидетельствуют описи имущества крупных монастырей второй половины XVI – первой половины XVII вв. В Иосифовом Волоцком монастыре в описи 1572 г. числится икона Макария и преподобного Александра Свирского в молении Спасу, а в описи 1591 г. – четыре иконы Макария без уточнения иконографии. Одна из них была вложена, как полагают исследователи, архимандритом Симонова монастыря Алексием. Писцовая книга Свияжска 1565/1566 – 1567/1568 гг. упоминает пядничную икону Макария в казне Богородицкого монастыря среди образов и предметов утвари, появившихся, как полагают исследователи, при архимандрите Германе (Полеве), постриженике Иосифова Волоцкого монастыря (с 1564 г. – архиепископ Казанский). К 1593 г. «образ пядница меншая Макарей Калязинской, а против его во облаце Спас» существовал в соборе Спасо-Прилуцкого монастыря (он же упоминается в описи 1688 г.). В Кирилловом Белозерском монастыре в 1601 г. находились две единоличные иконы Макария; образ преподобного в паре с образом блаженного Василия Московского был помещён на полях богато украшенной иконы Божьей Матери «Умиление», вложенной старцем Иоасафом Луженым в Кирилловскую церковь монастыря (судя по изображениям на полях, исследователи полагают, что икона была написана после канонизации блаженного Василия в 1588 г.); образ Макария входил в состав росписей 1585 г. в пролётах монастырских святых ворот, где он соседствовал с преподобными Сергием Радонежским, Кириллом Белозерским и Варлаамом Хутынским.