По мнению исследователей, враги Константина Ивановича Острожского не желали установления прочных связей между православным магнатом и самой почитаемой и богатой православной обителью Великого княжества Литовского. Константин Иванович Острожский помогал восстановлению запустевших киевских монастырей. В 1523 г. по его ходатайству были выданы королевские грамоты о возобновлении Межигорского в честь Преображения Господня и Михайловского монастырей. Их братия была освобождена от власти киевского воеводы и получила право выбирать настоятеля. В южной части Киевской митрополии Константин Иванович Острожский прилагал усилия для возобновления заброшенных обителей и устройства в них «общего жития». Иной характер носила его деятельность в северной части митрополии: он стремился укрепить позиции православия в таких важных центрах, как столица Великого княжества Вильно и Новогрудок – резиденция Киевских митрополитов. Главный православный храм Вильно – Успенский собор в 1506 г. частично обрушился из-за проводившихся в городе строительных работ. В 1511 г. Константин Иванович Острожский добился разрешения короля на восстановление собора. Ещё более важные шаги были предприняты в 1514 г. после битвы под Оршей. Тогда, ссылаясь на обет, данный им перед битвой, Константин Иванович Острожский добился от короля разрешения от 30 ноября 1514 г. построить в Вильно две каменные церкви – Святой Троицы и святителя Николая. В грамоте, оглашённой в присутствии членов рады, указывалось, что «на этот случай» король отменяет запрет на строительство православных храмов, установленный Литовским великим князем Витовтом. Для завершения строительства Константин Иванович Острожский продал в 1515–1516 гг. свои имения Игумен и Богушевичи за 10 тыс. коп грошей. В 1515 г. получил у короля разрешение построить мельницу на реке Вилейке, доходы от которой пошли на содержание Успенского собора. В 1521–1522 гг. Константин Иванович Острожский передал собору и митрополиту имения Шешоли, Крошты и Свираны. На доходы от этих имений в соборе следовало устроить два новых престола, где четыре священника и два диакона должны были совершать ежедневное поминовение рода Острожских. Константин Иванович Острожский стремился также укрепить положение собора во имя св. князей Бориса и Глеба в Новогрудке. 26 ноября 1517 г. по просьбе магната Сигизмунд I пожаловал собору пять «служб» людей и три пустоши в Церинской волости. В том же году Константин Иванович Острожский купил и передал собору имение Быкевичи, в начале 1519 г. – имение Хоневичи, приобретённое за 100 коп грошей. Константин Иванович Острожский прилагал усилия и для улучшения положения православных на «русских» землях Польского королевства, в частности, во Львове. В 1521 г. князь поддержал ходатайство Львовского братства, которое добилось смягчения многочисленных ограничений, наложенных на деятельность православных городскими властями и католическим духовенством: православные получили право приносить присягу в своей церкви, выступать свидетелями в суде по всем делам, магистрат при назначении православных священников должен был учитывать мнение «русской» общины, священники получили возможность в церковном облачении посещать больных со Святыми Дарами и провожать тела умерших. По ходатайству Константина Ивановича Острожского находившийся под опекой братства монастырь св. Онуфрия был освобождён от уплаты поземельного чинша (грамоты 1522 и 1524 гг.).