В 1492 г. Изабелла I согласилась финансировать проект Христофора Колумба, собиравшегося проложить короткий путь в Индию, все открытые им земли должны были войти в состав владений испанской короны. Систематическая колонизация Нового Света началась позднее, но уже в 1503 г. Изабелла I создала в Севилье Торговую палату (Casa de contratación), прообраз будущего Верховного совета по делам Индий (учреждён в 1511 г.; новый материк до XVIII в. в Испании продолжали называть «Индиями»), центрального органа управления колониями. В 1494 г. был подписан Тордесильясский договор с Португалией, согласно которому испанская и португальская сферы заморской экспансии разделялись демаркационной линией, проходившей в 370 лигах к западу от островов Зелёного Мыса. Этот договор заложил основы колониальной политики Пиренейских стран и утвердил исключительные права Испании и Португалии на господство в Новом Свете, Азии и Африке. Другие страны не признали условий договора, а в отношениях между Испанией и Португалией он действовал до второй половины XVIII в. Изабелла I покровительствовала культуре и искусству, собрала богатейшую библиотеку. Хронисты, публицисты и поэты воспевали королеву, превознося её нравственные достоинства и государственный ум, свершения и набожность. В придворной поэзии, равно как и в изобразительном искусстве, было принято отождествлять Изабеллу I с ветхозаветными героинями (Есфирью и Деворой), с античными богинями (Минервой и Дианой) и с Девой Марией. Несмотря на то, что Изабелла I считалась современниками могущественнее Фердинанда, в политической риторике она придерживалась традиционного этикета (образ дамы при рыцаре и покорной набожной супруги при своём господине-муже). В годы её правления были созданы шедевры испанского зодчества XV в.; распространённый тогда в архитектуре «испано-фламандский стиль» получил известность как «исабелино». Вместе с мужем похоронена в Королевской капелле в Гранаде. В ХХ в., в период диктатуры Франко (1939–1975 гг.), Изабелла I была провозглашена национальной героиней, в настоящее время ряд либеральных историков считают её роль в истории Испании преувеличенной, а статус важного исторического деятеля – фашистской мифологизацией. Испанские католики, напротив, выступают с инициативой канонизации королевы на том основании, что она боролась за чистоту веры, была милостива к индейцам. В 1958 г. по инициативе Вальядолидского архиепископа Хосе Гарсии Гольдараса был начат сбор материалов, необходимых для беатификации Изабеллы I. В 1972 г. собранные материалы представлены папской Конгрегации по делам святым, по решению которой 20 ноября 1972 г. в Риме открылся беатификационный процесс. После критики со стороны еврейских организаций и некоторых католических деятелей, возложивших на Изабеллу I ответственность за тысячи жертв инквизиции, папа Римский Павел VI прекратил процесс (1974 г.).