На иконе «греческого письма, на липовой доске» (около 53х44 см) по сторонам Богоматери «Знамение» изображены Николай Чудотворец и архиепископ Иоанн Новгородский. Во время существования обители пред иконой ежедневно служились молебны: после ранней обедни – в Троицкой церкви, после поздней – в соборе. По пятницам во время вечерни перед иконой читался акафист Божьей Матери. «Знамение» Верхнетагильская икона Божьей Матери (празднование 27 ноября) – почитаемый на Урале чудотворный образ. Согласно сложившемуся к концу XIX в. «Сказанию», икона была явлена в 1709 г. в лесу, на месте которого в 1716 г. возник посёлок Верхнетагильский Завод (ныне город Свердловской области). Первоначально икона находилась в одном из уральских скитов, который был разорён бурлаками, убившими насельников. Когда грабители собирались покинуть скит, от иконы был голос, повелевающий взять образ с собой. Те не посмели ослушаться и доставили икону в посёлок Невьянский Завод, где она находилась некоторое время. Один из жителей посёлка, Савва Медведев, был ложно обвинён в воровстве. Он усердно молился Богу об избавлении от навета, и ему было явление иконы «Знамение», от которой исходил голос: «Если ты обещаешь перенести меня в свой дом, будешь избавлен от возводимого на тебя напрасно обвинения». Савва выкупил икону за 3 руб., перенес её в свой дом и действительно освободился от подозрения. Вскоре он был переведён на жительство в посёлок Верхнетагильский Завод и увёз икону с собой. В 1753 г. передал её в верхнетагильскую Знаменскую церковь. В 1861 г. деревянный храм сгорел, но икона, у которой обгорела торцевая часть, уцелела. До ноября 1876 г., когда был освящён каменный Знаменский храм, она находилась в устроенной в заводской конторе церкви во имя пророка Илии. В настоящее время пребывает в Знаменской церкви у левого клироса на аналое под стеклом. К образу привешены украшения – дары от людей, получивших исцеление от иконы. «Сказание» о Верхнетагильской иконе Божьей Матери «Знамение», повествующее о её явлении и бывших от неё чудесах, сохранилось в рукописи начала XX в. Рукопись в восьмую долю листа, написанная чётким полууставом одной рукой на бумаге без штемпелей и водяных знаков, хранится в алтаре верхнетагильской Знаменской церкви. До конца 1920 гг. ежегодно в течение лета совершались крестные ходы с иконой на Невьянский, Верх-Нейвинский, Нейворудянский, Быньговский и Шуралинский заводы. Постановлением Патриарха Московского и всея Руси Алексия II от 5 октября 2001 г. было установлено общецерковное празднование этой иконе (особой службы нет). На иконе, писанной на доске (70х53,8х2,5 см), представлен поясной образ Богоматери; на Её груди в медальоне изображён благословляющий Христос Еммануил со свёрнутым свитком в левой руке.