При его жизни в монастыре была также построена церковь в честь Рождества Пресвятой Богородицы. Евфросин считал себя ктитором обители. Как полагают исследователи, строительство в монастыре велось на его средства, в завещании святого указаны его вотчина, «исады» (рыбные ловли), «клети» в городе, данные им братии в общее владение. По смирению Евфросин не принял духовного сана («не учитель, ни прозвитер есмь саном») и предоставил настоятельство своему ученику Игнатию, который стал его духовным отцом. Он подвизался в уединённой келье в лесу близ монастыря, на её месте позднее поставили крест, ещё один крест был установлен неподалёку, на месте молитвенных подвигов преподобного. Трёхсвятительский монастырь принимал и кормил странников, помогал хлебом окрестным крестьянам, из-за чего запасы обители зачастую истощались, однако по молитвам Евфросина чудесным образом восполнялись. В числе его учеников были будущие игумены Трёхсвятительского монастыря родные братья Игнатия Харалампий (второй игумен обители при жизни Евфросина и духовный отец святого) и Памфил, а также постриженики обители преподобные Савва Крыпецкий, Досифей Верхнеостровский, Онуфрий Мальский, Иоаким Опочский, Иларион Гдовский, Харитон Кудинский, основавший монастырь на Кудинском озере рядом с Торопцем. Евфросин преставился «лехко и дивно», при кончине, по Житию в редакции священника Василия, от тела святого распространилось благоухание. Преподобный был погребён между церковью Трёх святителей и церковь в честь Рождества Пресвятой Богородицы. Во второй половине 1560 – 1570 гг. в Елеазаровом монастыре на новом месте был возведён каменный собор во имя Трёх святителей, мощи преподобного были перенесены в собор и погребены близ стены за правым клиросом, место захоронения Евфросина было утрачено после закрытия Елеазарова монастыря в 1921–1923 гг. (монастырь возобновлён как женский в 2000 г.). Евфросин является автором монастырского Устава и завещания. Устав был написан для Трёхсвятительского монастыря в конце 1450 – начале 1460 гг.; в его заголовке говорится о благословении архиепископа Евфимия II (ум. в 1458 г.) и митрополита Феодосия (1461–1464 гг.) и является древнейшим русским общежительным уставом. При его составлении были использованы грамоты Снетогорскому монастырю Суздальского архиепископа Дионисия (1382/1383 г.), и митрополита Фотия (около 1417 г.), а также труды Василия Великого, преподобных Иоанна Лествичника, Исидора Пелусиота, Исаака Сирина и других отцов церкви. В Уставе Евфросин, по его признанию, опирался на опыт восточных подвижников – основателей общежительных монастырей преподобных Пахомия Великого, Саввы Иерусалимского и др. Устав состоит из краткого введения автобиографического характера и 29 глав. Основные положения Устава посвящены соблюдению в монастыре строгих норм общежития. В обители были запрещены личная собственность (в первую очередь, владение золотом или серебром, дорогой и излишней одеждой), еда и напитки в келье (кроме случая болезни). Насельники должны быть во всём послушны игумену (под угрозой заключения «в темници»).