В каждом номере печатались проповеди, поучения и беседы, среди их авторов были Черниговский архиепископ Филарет (Гумилёвский), протоиереи Василий Владиславлев, Родион Путятин, Александр Никольский, Ипполит Богословский-Платонов, Александр Невоструев, Алексий Белоцветов, священник Димитрий Кастальский, протоиерей Михаил Некрасов, священник Сергий Садковский («Катехизические беседы»), протоиерей Николай Елеонский (в том числе «Советы учащемуся юношеству»), архимандрит Никон (Рождественский; впоследствии архиепископ Вологодский), Петроградский митрополит Владимир (Богоявленский), протоиерей Иоанн Кронштадтский, святитель Макарий, епископ Арсений (Жадановский; «Духовные беседы»). В 1903–1916 гг. в каждом номере печатался духовный дневник «В объятиях Отчих» архимандрита Иосифа (Петровых; впоследствии митрополит Ленинградский). Выходили апологетические работы, например, «Современное богоборство и целительная сила христианства» протоиерея Сергия Четверикова. Христианскому осмыслению русской и зарубежной художественной литературы посвящено множество статей священника Н.А. Колосова (в частности, о романах Эмиля Золя), «Миросозерцание и герои Максима Горького пред судом православного читателя». В начале XX в. в «Душеполезном чтении» издавались назидательные рассказы и очерки Ивана Павловича Ювачёва («Монастырские очерки», «В затворе», «Мечтатель» и др.), Евгения Николаевича Погожева («На земном небе» и др.), стихотворения В.К. Недзвецкого, схиархимандрита Варсонофия (Плиханкова) и др. Печатались статьи по естествознанию: «Христианские размышления об устройстве Земли», «Органы слуха и голоса» Д.Ф. Голубинского, «Система Дарвина» Михаила Петровича Погодина, «Одеяние Земли» и «Мир насекомых» священника В. Владимирского, «Природа в религиозном восприятии» священника Иоанна Артоболевского и др. Хроника текущих событий в «Душеполезном чтении» всегда стояла на втором плане. В 1863–1871 гг. в журнале выделялся раздел «Известия и заметки», имевший отдельную пагинацию, в 1902 г. появилась рубрика «Отклики на современность», в 1912–1913 гг. – отдел «Библиография», который вёл редактор. Андрей Петрович Смирнов подготовил серию статей о событиях ветхозаветной истории «с применением к политическим и общественным явлениям нашего времени». В качестве приложений к журналу были изданы: «Древний патерик, изложенный по главам», «75 псалмов (с 76-го до 150-й) в русском переводе», «История святых Вселенских Соборов» Алеутского епископа Иоанна (Митропольского), три книги священника Андрея Хойнацкого о таинствах исповеди, брака и елеосвящения, первый том «Полного собрания резолюций митрополита Московского Филарета», «Рим и Папа пред судом совести и истории» Уильяма Юарта Гладстона и др.