Исследователи полагают, что икона была написана для Успенского собора Коломны по заказу великой княгини Евдокии (около 1353 – 1407 гг.) – супруги великого князя Дмитрия Ивановича – на молитвенную память о нём и воинах, погибших в битве на Дону в 1380 г. Почитание Донской иконы сложилось вскоре после создания, что доказывает наличие её ранних уменьшенных списков, однако её первоначальное название неизвестно. Первое упоминание об этой иконе встречается в летописях середины – второй половины XVI в. В царствование Ивана IV великий князь Дмитрий Иванович стал именоваться Донским, так же стали называться и заложенная им перед Куликовской битвой церковь Успения в Коломне (1379–1382 гг.), и хранившаяся в ней древняя чтимая икона Богоматери. Накануне выступления против Казанского ханства (1552 г.) Иван IV молился в Успенском соборе Коломны перед образом «пречистые, иже на Дону была с преславным великим князем Дмитрием Ивановичем». Победа способствовала прославлению иконы, получившей статус государственной святыни, перенесённой в придворный Благовещенский собор Московского Кремля. В Ливонской войне Донская икона также была заступницей и покровительницей православных воинов. В Полоцкий поход 1563 г. Иван IV взял с собой «непобедимую воеводу чюдотворную икону пречистые Богородици, сиречь Донскую, преже того стояла в соборном храме Успения пречистые на Коломне». В 1591 г. царь Фёдор Иванович молился в походной церкви перед Донской иконой о спасении Москвы от нашествия хана Казы-Гирея. В 1591 г. в память о чудесном заступничестве Богоматери на месте походной церкви был основан московский монастырь Донской иконы Божьей Матери. Для него сделали список чудотворной иконы – «подобие пречюдные иконы пречистые Богородицы Донския». В XVII в. Донская икона оставалась особо чтимой святыней, к ней, как к главной заступнице от «неверных», обращались при возникновении опасности вражеского нашествия. В 1646 г., во время нападения крымских татар на южнорусские земли (Украину), царь Алексей Михайлович, подобно Фёдору Ивановичу, молился перед Донской иконой, и нападение «агарян» было отбито. В честь этого события были совершены праздничные службы и крестные ходы с чудотворной Донской иконой в Донской монастырь, а в 1649–1660 гг. установлены ежегодные крестные ходы в день празднования Донской иконы. Во время больших крестных ходов Донскую икону выносили вместе с чудотворной Владимирской иконой Божьей Матери. В период войн с Турцией в XVII в. – Чигиринские походы (1677–1678 гг.) и Крымские походы князя Василия Васильевича Голицына (1687 и 1689 гг.) – почитание Донской иконы усилилось. В 1692 г. архимандрит Донского монастыря Антоний написал предисловие к вкладной книге монастыря «Слово известное всем благочестивым христианам», в котором, основываясь на сведениях «Повести о честнем житии царя и великаго князя Феодора Ивановича», подробно изложил историю чудесного избавления Москвы от Казы-Гирея, а также дополнил рассказ о победе на Куликовом поле актуальным для XVII в. вымышленным эпизодом о донских казаках, пришедших на помощь православному воинству и принесших в дар икону Донской Божьей Матери.