В другой новелле Юстиниана, изданной в том же 535 г., говорится о нравственных требованиях, предъявляемых к тем, кто хотели бы стать диакониссами. Их жизнь не должна вызывать никаких подозрений (и потому, в частности, вместе с диакониссой имеют право проживать только её ближайшие родственники), избираться они могут либо из девственниц, либо из единобрачных вдов; возраст диаконисс не должен быть ни слишком юным, ни преклонным, но должен «приближаться к 50 годам»; женщин моложе этого возраста можно поставлять в диакониссы только для женских монастырей; брак с диакониссой после её поставления невозможен. Эта новелла явилась уточнением вошедшего в Кодекс Феодосия закона 390 г. о 60-летнем возрасте диаконисс (в этом законе рассматривался, в первую очередь, вопрос о наследстве диаконисс). В 123-й новелле Юстиниана диакониссы без каких-либо оговорок рассматриваются в одном ряду с монахами и аскетами. Предъявляемое диакониссам со стороны Юстиниана требование безбрачия соответствовало практике древней церкви. Хотя, с одной стороны, из памятников эпиграфики и других источников известны примеры диаконисс, некогда состоявших в браке и даже имевших детей, не существует никаких твёрдых свидетельств о хотя бы одной диакониссе, продолжавшей брачную жизнь после своего поставления. С другой стороны, множество диаконисс, вне всякого сомнения, вели монашеский образ жизни. Так, в «Паломничестве Эгерии» упоминается диаконисса Марфана, которая «управляла монастырями апотактиток, то есть дев». Епифаний Кипрский свидетельствует, что уже в его время диакониссами были или единобрачные женщины, воздерживавшиеся от супружеской жизни, или единобрачные вдовицы, или девственницы. В Армянской церкви замужние диакониссы были запрещены 17-м правилом Двинского собора 527 г. В Галлии 17-е правило II Арелатского собора 533 г. говорит о диакониссах как о вдовых женщинах и категорически воспрещает им вступление во второй брак. Обязательный целибат диаконисс сближает этот чин с раннехристианскими чинами дев и вдовиц. В VI в. на Западе прославилась св. Радегунда, одна из жён меровингского короля Хлотаря I, ставшая диакониссой в том числе ради того, чтобы расстаться с ненавистным ей супругом. 48-е правило Трулльского собора позволяло поставлять в епископы женатого кандидата, только если его супруга по собственному желанию поступит в монастырь, отдалённый от епархии, епископом которой становится её муж; правило говорит о возможности поставления её при этом в диакониссы. Аналогичные примеры поставления женщины в диакониссы вместе с хиротонией её супруга во епископа – это уже упоминавшееся поставление св. Нонны, а также последовавшее за рукоположением в 753 г. нового Равеннского архиепископа Сергия поставление его жены Евфимии в диакониссы. Правилом об обязательном безбрачии диаконисс (ср.: 44-е правило Василия Великого) обусловлены и предписания о её возрасте. Юстиниан определяет его как «приближающийся к пятидесяти годам», Вселенские соборы предписывали как минимум 40-летний возраст (15-е правило четвёртого Вселенского собора; 14-е правило Трулльского собора).