В 1820 – начале 1830 гг. выстроены кельи, трапезная, мастерская, хлебные амбары, прачечная и другие жилые и хозяйственные постройки, вырыты два пруда для разведения рыбы. Почти все первые насельницы Аносина Борисоглебского монастыря (12 человек) происходили из крестьянских семей и из дворовых людей. С октября 1832 г. по 1863 г. обитель вопреки желанию аносинских игумений была местом для покаяния и исправления женщин, осуждённых за пьянство и прелюбодеяние, присылались в монастырь и женщины-старообрядки «для увещания к возвращению из раскола к Православию». При игуменьи Анастасии (Комаровой; 1837–1854 гг.) указом Московской консистории на 20 лет возобновилась аренда монастырских земель, в 1842 г. монастырь был наделён лесными угодьями. Заботами игуменьи Евгении (Озеровой; 1854–1875 гг.), внучки основательницы монастыря, в 1855 г. были построены каменный келейный корпус, настоятельские кельи, деревянные гостиничный корпус и дома для священнослужителей. Благодаря пожертвованиям купца Павла Григорьевича Цурикова сооружён странноприимный дом, а также реконструирован Троицкий храм, Тихвинский придел которого 23 июля 1867 г. был переосвящён в честь Успения Божьей Матери. Согласно описи 1876 г., при игуменьи Рафаиле (Ровинской; 1875–1879 гг.) в Аносином Борисоглебском монастыре проживали 180 насельниц. Доходы обители во второй половине XIX в. составляли 5-6 тыс. руб. серебром в год и складывались из пожертвований, денежных вкладов, рукоделия сестёр и доходов от хозяйственных угодий. К 1900 г., при игуменьи Иоанне (Макаровой; 1879–1918/1919 гг.), обитель владела 307 десятинами земли, в том числе пахотной – 33 десятинами, луговой – 6, лесной – 260, неудобной земли – 8 десятинами. От казны обитель получала ежегодный оклад – 337 руб. 43 коп. По штатам 1906 г. кроме игуменьи и казначеи в монастыре должны были пребывать десять монахинь и двенадцать послушниц (фактически их было соответственно 12 и 9). В начале XX в. Аносин Борисоглебский монастырь называли «женской Оптиной» и «Аносиной пустынью». Многие насельницы обители оставили воспоминания, стихи, письма и другие свидетельства о жизни монастыря: «Беседы с моей дочерью» игуменьи Евгении (Мещерской), «Памятные записки» – дневник и воспоминания игуменьи Евгении (Озеровой), воспоминания схимонахини Леонтии (Левицкой) и др. Хотя число насельниц в обители было небольшим, 11 из них впоследствии стали игуменьями других женских монастырей: Олимпиада – игуменьей коломенского Брусенского монастыря, Евгения – игуменьей московского в честь Вознесения Господня монастыря и др.